肉毒碱棕榈酰基转移酶1B(CPT1B)/CPT1A蛋白/肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)重组蛋白的方法

肉毒碱棕榈酰基转移酶1B(CPT1B)重组蛋白

中文名称:肉毒碱棕榈酰基转移酶1B(CPT1B)重组蛋白

英文名称:Recombinant Carnitine Palmitoyltransferase 1B, Muscle (CPT1B)

英文简称:CPT1B

规格:10μg 50μg 200μg 1mg 1g

来源:原核表达

宿主:E.coli

储存条件:长期储存,建议添加载体蛋白(0.1%HSA或BSA),并储存在-20~ -80°C。避免多次冻融。

肉毒碱棕榈酰基转移酶1B(CPT1B)重组蛋白方法

1.载体构建和细菌培养

1) 采用RT-PCR 扩增得到目的基因,构建到表达载体(PGEX-4T-1)上;

2) 用构建质粒转化表达菌BL21,LB 平板37℃;

3) LB 平板上挑取单一菌落接入5mL LB 培养基(100ug/mL Amp)中,37℃培养3~5h;

4) 将5mL 菌液接入1L LB(100ug/mL Amp)液体培养基中,37℃培养至OD60≈0.6,加入0.3mmol/L 的IPTG,

5) 16℃诱导16h;

6) 将培养好的菌液于5000r/min 离心10min,弃去上清液,收集菌体,离心后菌体沉淀悬浮于25mL Binding buffer 中。

2.细胞破碎和蛋白分离

1) 往悬浮好的菌液中加入适量蛋白抑制剂(10uL 的10mg/mL antipain,10uL 的10mg/mL leupeptin 和1mL

2) 的1mol/L PMSF),冰浴放置;

3) 超声破碎,每个循环26 次,超声6s,间隔5s,视破碎效果共2~4 个循环,破碎后的菌体4℃ 1800r/min

4) 离心30min,上清保持在4℃;

5) GST 柱先用PBS 缓冲液平衡,上样结合30~60min,每5~10min 搅拌一次,流干;

6) 用2~3 倍体积PBS 缓冲液平衡清洗非特异性蛋白,流干,加入15mL 洗脱缓冲液洗脱;

7) 由于残存少量蛋白酶,洗脱出来的目的蛋白溶液可于4℃保存几小时;

8) SDS-PAGE 检测初步纯化效果,进行下一步纯化步骤。

肉毒碱棕榈酰基转移酶1B(CPT1B)重组蛋白解决方法

1) 裂解过程中,采用温和的裂解条件;

2) 在细胞裂解前的缓冲液中加DTT;

3) 浓缩样品,结合能力依赖浓度;

4) 可以通过降低结合的温度来改善结果;

5) 确认至少用5 倍柱体积的PH 6.5~8.0 的缓冲液平衡过。

反式高尔基体网状结构蛋白2(TGOLN2)
人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA检测试剂盒
兔C反应蛋白
C-反应蛋白(hs-CRP)
髓磷脂蛋白
青霉素结合蛋白(penicillin binding proteins, PBPs)
丙型肝炎病毒NS5A蛋白
乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式
HCV核心蛋白
乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白
杆状病毒反式激活蛋白IE-1
小鼠p-tau蛋白181P(p-tau-181P)elisa试剂盒
大鼠β-连环蛋白(β-catenin)elisa试剂盒
猪中性粒细胞明胶酶关联脂质运载蛋白(NGAL) elisa试剂盒
人丝蛋白Aα(FLNα) elisa试剂盒
人聚集蛋白(Agrin)elisa试剂盒
小鼠Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)elisa试剂盒
大鼠全段甲状旁腺素(i-PTH)elisa试剂盒
兔热休克蛋白70(HSP-70)elisa试剂盒
人激活素A受体Ⅰ(ACVR1) elisa试剂盒
人组织型纤溶酶原激活因子(tPA) elisa试剂盒
人α乳清蛋白(α-La)elisa试剂盒
小鼠胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)elisa试剂盒
大鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)elisa试剂盒
兔子γ干扰素(IFN-γ)elisa试剂盒
人膜突蛋白(MSN) elisa试剂盒
碳反应蛋白C-Reactive Protein
c 反应蛋白 人
鸡体内产生的抗C反应蛋白抗体
山羊产生的抗C反应蛋白抗体(全抗血清)
兔产生抗C反应蛋白抗体
抗C反应蛋白抗体,克隆2A8.1
抗C反应蛋白兔pAb
c反应蛋白,人血清,高纯度
C反应蛋白,人,重组,大肠杆菌
人 C 反应蛋白 ELISA 试剂盒
SILu ? 蛋白 CRP C 反应蛋白 人
单克隆抗 C 反应蛋白 小鼠抗
大鼠CRP/C反应蛋白酶联免疫试剂盒
SILu?Lite CRPC反应蛋白人类

c-反应性/CRP人
小鼠产生单克隆抗CRP抗体
小鼠产生单克隆抗CRP抗体
兔体内产生抗CRP抗体
兔体内产生抗CRP抗体

兔体内产生的抗VAC14抗体
小鼠产生抗单核细胞趋化蛋白单克隆抗体
抗FOXM1抗体
人血清
重组人丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白
羧肽酶N1(CPN1)重组蛋白 

zzj 2021.3.25

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