染色原理：

瑞氏色素是酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue)组成的复合染料, 对原生质的染色有很好的区别作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料结合后，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质、原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。瑞氏染液为蓝色澄明液体，有甲醇特异香味，主要由美蓝、伊红 Y、甲醇、甘油组成，其中甲醇的作用是溶解美蓝和伊红和固定细胞形态。

基姆萨染液由天青，伊红（质）组成。染色原理和结果与瑞氏染色法基本相同。但本法对细胞核（蓝）和寄生虫着色较好，结构显示更不清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。为兼顾二者之长，可用复合染色法。即以稀释基姆萨液代替缓冲液，按瑞氏染色法染 10min。或先用瑞氏染色法染色后，再用稀释吉姆萨复染。

试剂盒组成：
瑞士染色液；吉姆萨染色液；磷酸盐缓冲液pH6.8

组织固定

按常规涂片、空气干燥、4%多聚甲醛固定.

操作步骤

1.常规方法制备血液涂片或骨髓涂片或细菌涂片，待涂片自然干燥。

2.将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。

3.滴加 Wright stain 覆盖涂片，室温染色 1～2min，轻轻晃动玻片或采用其他方式混合，1-2min 后，滴入磷酸盐缓冲液（pH6.4-6.8）（染液与缓冲液的比例约为 1：1.5，冬季 1：1，夏季 1：2）。以气囊向玻璃片上轻轻打气，使染液和缓冲液混合均匀，一般不宜口吹起，以免呼出二氧化碳改变缓冲液酸碱度而影响染色。

4.用自来水或蒸馏水从玻片一端轻轻冲洗

5.稀释染液（取磷酸缓冲液 9 份，吉姆萨染液 1 份充分混合），将染液滴在组织或细胞上， 滴染 10~15min。

6.蒸馏水漂洗干净，紧急时趁湿加盖玻片镜检;

7.干燥。

8.镜检：先用低倍镜观察血涂片，再用油镜.

结果：

将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。在显微镜下，成熟红细胞染成粉红色；血小板染成紫色；中性粒细胞胞质染成粉红色，含紫红色颗粒； 嗜酸性粒细胞含大的桔黄色颗粒；嗜碱性粒细胞胞质含有大量深紫蓝色颗粒；单核细胞胞质染成灰蓝色；淋巴细胞胞质染成淡蓝色。

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zzj 2021.3.26