ChIP-seq分析的数据标准

以下罗列了ChIP-seq数据分析中的ENCODE标准,针对不同的免疫共沉淀类型有不同的标准,以下从组蛋白和转录因子2个方向介绍:


一、组蛋白

生物学重复

至少2个

抗体

满足ENCODE Consortium的标准。可以进一步参考以下文献标准:https://www.encodeproject.org/documents/4bb40778-387a-47c4-ab24-cebe64ead5ae/@@download/attachment/ENCODE_Approved_Oct_2016_Histone_and_Chromatin_associated_Proteins_Antibody_Characterization_Guidelines.pdf

input对照

每次ChIP实验必需有input对照样品

文库复杂度

Non-Redundant Fraction (NRF) 、PCR Bottlenecking Coefficients 1 and 2, or PBC1 and PBC2进行计算,标准为:NRF>0.9, PBC1>0.9, and PBC2>10.

数据量

对于narrow-peak组蛋白实验,每次重复 ≥ 20M 可用的插入片段

对于broad-peak组蛋白实验, 每个重复  ≥45 M 可用的插入片段

进一步参考:https://www.encodeproject.org/data-standards/terms/#read-depth

注意! H3K9me3是一个例外,其富集于基因组中的重复区域。相对于其他的broad标记,仅有少量的H3K9me3 peaks位于非重复区域。

这就导致了许多ChIP-seq数据不能比对到基因组中的唯一区域。 组织和原代细胞(primary cells)需要保证45M的总比对reads。

下表为宽(broad)、窄(narrow)峰的组蛋白类型:

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组蛋白类型

二、转录因子

大部分指标同组蛋白

以下为特有指标:

数据量

至少20M可用的插入片段

    低深度:10-20 M

    不足的: 5-10 M

    极低深度: < 5 M

可重复性:

IDR values (Irreproducible Discovery Rate)

重复间和假定重复间的IDR值均要小于2

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IDR

进一步参考:https://sites.google.com/site/anshulkundaje/projects/idr

三、参考资料:

https://www.encodeproject.org/chip-seq/histone/#standards

https://www.encodeproject.org/chip-seq/transcription_factor/

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