ips细胞培养技术、实验材料应用报告

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iPS细胞培养新方法 可减少移植引发感染症风险

2014年01月13日报道,日本京都大学日前发表一份公报称,其研究小组开发出一种新方法,可以简单地培养诱导多功能干细胞(iPS细胞),同时减少移植过程中引发感染症的风险。

日本京都大学日前发表一份公报称,其研究小组开发出一种新方法,可以简单地培养诱导多功能干细胞(iPS细胞),同时减少移植过程中引发感染症的风险。

迄今为止,在培养iPS细胞时,需要使用含有实验鼠饲养细胞和牛血清的培养液补充营养。但是,在利用这种iPS细胞培养出的组织和细胞时,来自动物的感染症有可能感染人体,且测试其安全性也耗时很长。

京都大学iPS细胞研究所的山中伸弥和中川诚人等研究人员注意到,一种叫做“Laminin-511”的蛋白质能把细胞粘结在一起,于是利用这种蛋白质的片段“Laminin-511E8”(LN511E8)制作出培养基,发现iPS细胞能够在培养皿上牢固“扎根”。为取代动物成分,研究小组还制作出添加了氨基酸和维生素的培养液,这样能增加安全性更高的iPS细胞的数目。

由于此次开发出的方法不使用动物成分,可以减少确认安全性的实验程序,简单高效,有望使iPS细胞早日在再生医疗领域实现临床应用。

研究小组还发现,利用新方法制作的人类iPS细胞,能够发育为可产生神经传导物质多巴胺的神经细胞、能制造胰岛素的细胞以及血液细胞等,有望用于治疗帕金森氏症和糖尿病等疾病。

研究小组还利用这种新方法成功培育了与iPS细胞拥有同样能力的胚胎干细胞(ES细胞)。这一成果的论文已刊登在新一期英国《科学报告》杂志上。

Nature子刊:如何更好地培养iPS细胞

2014年06月26日,目前人类诱导多能干细胞(hiPSC)的培养条件虽然有助于维持细胞的多能性,但也可能引入污染物,大大限制了这些细胞在临床上的应用。为此,日本RIKEN的研究团队找到了一个更好的hiPSC培养方案。他们发现,一种参与免疫应答的趋化因子CCL2能够替代干细胞培养中的传统生长因子,增强干细胞的多能性。

干细胞能够分化成为机体内的任何细胞类型。日本科学家山中伸弥(Shinya Yamanaka)开发的诱导多能干细胞技术,可以将成熟细胞重编程为多能细胞,使其回到类似干细胞的状态,重新获得强大的分化能力。这一技术在再生医学领域有着广阔的应用前景,被视为细胞替代疗法的新希望。

然而,目前人类诱导多能干细胞(hiPSC)的培养条件虽然有助于维持细胞的多能性,但也可能引入污染物,大大限制了这些细胞在临床上的应用。

 

为此,日本RIKEN的研究团队找到了一个更好的hiPSC培养方案。他们发现,一种参与免疫应答的趋化因子CCL2能够替代干细胞培养中的传统生长因子,增强干细胞的多能性。这一成果发表在Nature旗下的Scientific Reports杂志上。

培养hiPSC的标准方法需要用bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)来维持其多能状态。在这样的培养条件下,hiPSC其实更接近于外胚层干细胞(epiblast stem cell),而不是真正的胚胎干细胞。

研究人员将培养基中的bFGF换成CCL2进行研究。他们发现,CCL2也能够激活JAK/STAT通路,该通路与免疫应答和多能干细胞的维持有关。研究显示,用CCL2进行培养会增强多能性标志基因的表达。

为了全面理解CCL2的作用机制,研究人员分别用CCL2和bFGF培养hiPSC,并对二者的转录组进行了比较分析。他们发现,在CCL2培养的干细胞中,低氧应答的相关基因表达水平更高,比如HIF2A (EPAS1)。这说明CCL2通过诱导类似低氧应答的反应,增强干细胞的多能性。这一发现将吸引研究者们,进一步探索细胞压力(例如低氧)与细胞多能性增强之间的关系。

领导这项研究的Yuki Hasegawa指出,“我们发现,表达差异最为显著的基因与低氧应答有关。事实上,低氧在肿瘤发展和多能性维持中的确有着重要的作用。我们的这项研究可以帮助人们进一步提高iPSC的质量,推动这些细胞在再生医学和疾病研究中的应用。”

研究还显示,与bFGF相比,CCL2培养的hiPSC分化效率更高。人们可以利用CCL2实现无滋养层细胞的hiPSC培养,防止病毒或其它污染物对干细胞产生影响。为了更好的利用CCL2,培养质量更加稳定的人类iPSC,研究人员还开发了一种特殊的培养皿,其上覆盖着连有CCL2的微珠。

日本研发新型iPS细胞培养技术 培养速度是目前的十倍 

2017-02-10 人民网报道,人民网东京2月10日电 据《朝日新闻》报道,日本京都大学和大阪GUNZE株式会社的研究团队近日成功开发出一种新的iPS细胞及胚胎干细胞(ES细胞)培养技术,培养速度是目前的十倍。

利用iPS细胞制作组织和器官需要培养大量细胞。然而,目前在培养皿中的培养量较小,在容器中加入多量的培养液加以搅拌的方法效率又比较低。

该研究团队的龟井谦一郎特定副教授等人使用明胶等,开发出了一种极细的布状纤维材料。将iPS细胞放在这种材料中培养,可在短时间内培养出高品质的iPS细胞。这种方法可将培养时间缩短至当前的五至十分之一,也可节约成本。龟井谦一郎表示:“今后会考虑增大这种材料的面积,以期实际投入使用。” 

当然,如果要进行IPS细胞重编程也是灰常方便的,

实验涉及原代细胞培养、电转、鉴定、支原体检测等等各种实验,

涉及的实验主要有以下产品清单:点击蓝字直接查看详情

货号 中文名称 包装量 单位
GP011020 iPS细胞重编程质粒套装 20次
       
货号 中文名称 包装量 单位
MP015100 皮肤成纤维细胞生长培养基 100ml
MP015500 皮肤成纤维细胞生长培养基 500ml
MP025100 尿液细胞生长培养基 100ml
MP025500 尿液细胞生长培养基 500ml
       
货号 中文名称 包装量 单位
AAB-1001 LONZA Amaxa电转仪 1
       
货号 中文名称 包装量 单位
KN015005 PBMC电转重编程试剂盒 5次
KN015025 PBMC电转重编程试剂盒 25次
KN025005 皮肤成纤维细胞电转重编程试剂盒 5次
KN025025 皮肤成纤维细胞电转重编程试剂盒 25次
KN035005 尿液细胞电转重编程试剂盒 5次
KN035025 尿液细胞电转重编程试剂盒 25次
       
货号 中文名称 包装量 单位
PG012010 重组人FGF2/bFGF 10ug
PG012100 重组人FGF2/bFGF 100ug
PG013001 重组人FGF2/bFGF 1mg
PR012005 重组人LIF蛋白 5ug
PR012020 重组人LIF蛋白 20ug
PR012100 重组人LIF蛋白 100ug
PR022010 重组人Activin A蛋白 10ug
PR022050 重组人Activin A蛋白 50ug
PR032005 重组人Noggin/NOG蛋白 5ug
PR032020 重组人Noggin/NOG蛋白 20ug
PR032100 重组人Noggin/NOG蛋白 100ug
       
货号 中文名称 包装量 单位
PA012050 兔抗人Oct4多抗 50ul
PA012100 兔抗人Oct4多抗 100ul
PA012200 兔抗人Oct4多抗 200ul
PA022050 兔抗人Nanog多抗 50ul
PA022100 兔抗人Nanog多抗 100ul
PA022200 兔抗人Nanog多抗 200ul
       
货号 中文名称 包装量 单位
GQ011001 人Oct4 qPCR引物对 1nmol
GQ021001 人Nanog qPCR引物对 1nmol
GQ031001 人GAPDH qPCR引物对 1nmol
GQ041001 人PAX6 qPCR引物对 1nmol
GQ051001 人FOXA2 qPCR引物对 1nmol
GQ061001 人MSX1 qPCR引物对 1nmol
       
货号 中文名称 包装量 单位
BF012050 Leucosep 12ml PBMC分离管 50个
BF013500 Leucosep 12ml PBMC分离管 500个
BF022025 Leucosep 50ml PBMC分离管 25个
BF023250 Leucosep 50ml PBMC分离管 250个
       
货号 中文名称 包装量 单位
KM012020 染色法支原体检测试剂盒 20次
KM022048 PCR法支原体检测试剂盒 48次
KM032010 发光法支原体检测试剂盒 10次

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