肥大细胞甲苯胺蓝染液Toluidine blue Stain Kit使用比色法鉴别T-淋巴细胞和B-淋巴细胞

肥大细胞(Mast Cell)来源于未分化的间充质细胞,近年来有人认为可能来自胸腺和骨髓。正常多见于小血管周围,一般在结缔组织中都含有少量的肥大细胞,也常见于支气管周围和胰的小叶间导管周围,而在肠系膜的小血管周围都有大量的肥大细胞。肥大细胞较一般细胞大,直径约20~30μm。呈圆形或椭圆形;胞核较小,圆形;胞质内充满粗大并具有异染性的圆形嗜碱性颗粒。

【染色结果】肥大细胞颗粒含有肝素和组织胺等,这些属于硫酸酯,呈异色性。因此,用易染性染料甲苯胺蓝可以使其呈异色性的红紫色。

【所需仪器】光学显微镜、玻片、染缸、滴管、秒表、记号笔等。

本试剂主要用以骨髓细胞涂片及血液细胞涂片染色检查,可鉴别T-淋巴细胞和B-淋巴细胞,前者多为阳性,而后者为阴性。具有简易、快速、保质期长,结果易于观察和判断等优点。

比色法:

供试品溶液加入适量显色剂后测定吸光度以测定其含量的方法为比色法。

用比色法测定时,应取数份梯度量的对照品溶液,用溶剂补充至同一体积,显色后,以相应试剂为空白,在各品种规定的波长处测定各份溶液的吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线,再根据供肥大细胞甲苯胺蓝染液试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度,并求出其含量。

也可取对照品溶液与供试品溶液同时操作,显色后,以相应的试剂为空白,在各品种规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度,按上述(1)法计算供试品溶液的浓度。

除另有规定外,比色法所用空白系指用同体积溶剂代替对照品或供试品溶液,然后依次加入等量的相应试剂,并用同样方法处理制得。

在分光光度计中,将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时,便可得到与不同波长相对应的吸收强度。如以波长(λ)为横坐标,吸收强度(A)为纵坐标,就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行肥大细胞甲苯胺蓝染液物质定性、定量的分析方法,称为分光光度法,也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法,称为紫外分光光度法;用可见光光源测定有色物质的方法,称为可见光光度法。它们与比色法一样,都以Beer-Lambert定律为基础。 上述的紫外光区与可见光区是常用的。但分光光度法的应用光区包括紫外光区,可见光区,红外光区。波长范围(1)200~400nm的紫外光区,(2)400~760nm的可见光区, (3)2.5~25μm(按波数计为100000px<-1>~10000px<-1>)的红外光区。

紫外分光光度计,可见分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。  

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zzj 2021.2.5

 

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